Spökjakten börjar igen! Efter att ha fått en inbjudan att bo på ett lyxhotell förbereder sig Luigi för att tillbringa en idyllisk semester med Mario och hans vänner. Drömmen förvandlas snabbt till en mardröm när Kung Boo avslöjar att allt var ett knep för att fånga Mario och hans vänner! Återigen, assisterad av den excentriske professor K. Tastroff, är det upp till den mest orädda av våghalsar att ge sig ut och utforska ett hotell som är allt annat än en idealisk destination...