Spökjakten börjar igen! Efter att ha fått en inbjudan att bo på ett lyxigt hotell förbereder sig Luigi för att tillbringa en idyllisk semester med Mario och hans vänner. Drömmen förvandlas snabbt till en mardröm när King Boo avslöjar att allt var ett knep för att fånga Mario och hans följeslagare! Återigen med hjälp av den excentriske professorn K. Tastroff är det upp till den fegaste av de vågade att ge sig ut på att utforska ett hotell som inte är ett idealiskt resmål...